产品目录

本产品是利用我司BalBcellProbe M系列探针进行线粒体超氧化物特异性染色的试剂盒，适用于动物细胞。本试剂盒中的BalBcellProbe M13线粒体超氧化物染色探针为红色荧光标记的线粒体探针，具有510/580nm的最大激发/发射波长。

BalBcellProbe M13线粒体超氧化物染色探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的线粒体体进行选择性染色的一类新型荧光染料，该探针可以选择性标记线粒体，包含标记线粒体的弱巯基反应性的氯甲基官能团。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上。一旦进入线粒体后，快速被超氧化物氧化，并产生红色荧光。BalBcellProbe M13线粒体超氧化物染色探针只可被超氧化物氧化，而不被其他活性氧类(ROS)和活性氮类(RNS)氧化。氧化产物结合核酸后，可产生大量红色荧光。

• 仪器准备：
  荧光显微镜/激光共聚焦、离心机、移液器、冰箱、冰盒
  
• 试剂准备：
  PBS缓冲液、HBSS
  
• 耗材准备：
  离心管、吸头、一次性手套

• 探针长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
  
• M13染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
  
• 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底，可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
  
• 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
  
• 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
  
• 染色后立即进行分析。

• 染色工作液配制：
  根据样本数量，用染料稀释液将BalBcellProbe M13荧光染料10倍稀释，再用HBSS缓冲液或者相应的培养基10～50倍稀释，配制成染色工作液。
  
• 细胞染色：
  
  • 对于贴壁细胞：
    
    • 培养皿/培养板准备细胞样本。
      
    • 待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下避光孵育10分钟～15分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
      
    • 利用新鲜培养基替换上述染色液。
      
    • 荧光显微镜（含合适滤片）或激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪下观察。最大激发/发射波长为510/580nm。
    
    
  • 对于悬浮细胞：
    
    • 离心，吸除上清。
      
    • 利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下避光孵育10分钟～15分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
      
    • 离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
      
    • 置于荧光镜下观察。或流式细胞仪、荧光酶标仪检测。最大激发/发射波长为510/580nm。